Calypso

Calypso II

蛋白质 - 蛋白质或其他大分子相互作用的无标记,无固定化表征,具有成分梯度的多角度光散射。

CG-MALS

Calypso®II与DAWN®miniDAWN®MALS检测器结合使用,可测量复杂生物分子相互作用的结合亲和力和绝对分子化学计量。


Weight-Average Molar Mass

除了平衡结合常数Kd和可逆的自缔合和杂缔合的绝对化学计量外,它还可以帮助确定反应或聚集速率,非特异性相互作用参数(病毒系数),甚至可以自动测量聚合物重均摩尔质量和dn/dc


CALYPSO Software

每个Calypso都随附有一个CALYPSO software的备份,这是最通用的软件包,可用于通过光散射分析溶液中的生物分子相互作用。

Creating composition gradients...

CG-MALS由一台可以连接到MALS仪器的 Calypso 和可选的浓度检测器组成。 Calypso可以进行样品的制备和输送,并根据比例帮助精确混合多达三种不同的溶液,然后注入检测器中。

通过将Calypso的泵设置为适当的流量比可以得到准确的成分,所有这些都由CALYPSO™软件通过直观的GUI控制。 混合是通过静态混合器同时从所有三个泵中分配溶液来实现的。

...that work with MALS detectors

可靠的光散射测量要求对样品进行脱气和过滤。 Calypso包含内置的小体积脱气机和过滤器外壳,通过PEEK管道和手拧接头进行连接。 甚至过滤器外壳也是用手拧紧的,采用了专有设计,以提供最大的便利。

Calypso features

  • B生物相容性润湿材料。
  • 可以灵活地重组流体路径,并根据需要使用不同的润湿材料。
  • 通过锥形管方便地加载样品或稀释液:5、15、50 mL。
  • 自动注入触点闭合信号,触发ASTRA®DYNAMICS®软件的数据采集,用于CALYPSO软件不支持的数据采集和分析(例如,DLS采集)。
  • 内置的清洗口,允许泵吸取清洗液进行实验后清洗。将 Orbit 溶剂选择阀 添加到设置中时,可实现两种全自动的不同顺序的清洗方式,例如:缓冲液(清洗蛋白质)和水(清洗缓冲盐)或洗涤剂和水。这些操作可以被附加到无人参与操作的方法中,节约时间。

Play video to learn more about the Calypso system

 

Calypso Experimental Setup

Label-free, immobilization-free

成分梯度多角度光散射(CG-MALS)使用一系列不同成分或浓度的未分级样品,以表征各种大分子相互作用。 无需进行特殊修改(例如,标记样品或固定程序):样品未标记且完全在溶液中。

解决一系列生物分子现象

Calypso硬件和软件支持的主要分析技术是:

  • 动态平衡:蛋白质,寡核苷酸和其他生物分子的特异性结合和复杂组装; 从picomolars 到 millimolars 的 KD(平衡解离常数); 缔合复合物的绝对分子化学计量; self and/or heteroassociations
  • 非特异性大分子相互作用: 自维里系数和交叉维里系数
  • 停流动力学:聚集,解离和其他与时间有关的反应:平衡时间从数秒到数小时
  • Zimm图: 利用浓度梯度可以帮助确定溶液中样品的平均摩尔质量MW,尺寸 Rg 和第二维里系数
  • 折射率增量: dn/dc

Calypso的自动化提高了生产率,而CALYPSO软件则提供了无与伦比的交互模型选择。 相对于其他表征蛋白质相互作用的技术,例如表面等离振子共振,沉降平衡,动力学排斥或等温滴定量热法,以及手动CG-MALS测量,Calypso可以提供快速而准确的结果。

Applications

Drug Discovery

  • 量化酶/抑制剂或抗体/抗原相互作用的结合亲和力和化学计量,包括复杂的多价和多蛋白复合物形成
  • 研究小分子对蛋白质-蛋白质相互作用的影响

Process Improvement

  • 确定第二维里系数并调整缓冲液参数以提高配方稳定性和粘度
  • 确定交叉维里系数以优化抗体纯化并了解大型辅料对制剂的影响

Self-assembly / Aggregation

  • 量化溶剂离子强度,pH或赋形剂对聚合或蛋白质缔合的影响
  • 通过摩尔质量和回转半径的变化率以及流体动力学半径(可使用WyattQELS模块或NanoStar通过ASTRADYNAMICS进行分析)来测量自组装和聚集动力学

Biotech R&D

  • 在各种缓冲液组成,时间和温度范围内表征大分子结合亲和力和相关的复杂化学计量

Deceptively simple

从概念上讲,Calypso “只是”一个装有注射泵和管路的盒子,对吗?好吧,这就是我们所想的-直到我们遭遇到挑战性的生物分子相互作用研究和精密的光散射仪器的需求。它可以同时实现:

  • 高精准度
  • 最小样品消耗
  • 从肽到高浓度单克隆抗体到纳米凝胶的相容性
  • 亲和力范围从pM到mM

尽管我们仍然在资金和消耗品方面提供了卓越的易用性、准确性和合理的成本,但我们不得不扩大现有技术的限制。

We worked hard, so you don't have to

我们不遗余力地寻找满足我们所有需求的稀有部件,如独一无二的注射泵和压力传感器,以及难以购买的30纳米孔径、滤膜和低体积、高效脱气器。我们买不到的东西,我们就从零开始创新和设计。

用户对我们独特的,超低死体积的,手紧式过滤器外壳感到特别满意,这有助于确保为高亲和力分析提供足够的溶液清洁度,且仅保留很少的样品。 与供应商共同开发了特殊的阀门和注射器,以最大限度地提高注射器泵的性能和易用性。

认识到CG-MALS对于大多数用户来说并不熟悉,我们还开发了教程,应用程序指南,方法模板以及其他支持资料和培训,以帮助您入门并保持仪器的正常使用。 充分利用这种惊人的强大技术-我们随时为您提供帮助。

Some additional Calypso features

对布局和设计进行了微调,以减少样品使用量,同时提高自动化程度并保持与MALS检测器的终极产品DAWNminiDAWN的兼容性。 Calypso的特殊功能包括:

  • 大多数管是内径为0.010英寸的PEEK管(0.25毫米),以实现生物相容性和小体积。对于非水溶液,可以更改为PTFE或不锈钢管,对于粘性溶液,可以更改为更大内径的管路。
  • 多种注射器尺寸以满足特定需求
  • 样品和缓冲液的在线脱气
  • 易于检修所有管路和过滤器,以便快速维护
  • 压力警告指示何时滤膜饱和或毛细管堵塞

Protein-Ligand Binding

大多数蛋白质-配体和类似的生物分子相互作用最好在1 mg / mL或以下测量。 CG-MALS配置应包括:


Non-Specific Interactions

非特异性相互作用通常在1-25 mg / mL范围内测量。 配置应包括:

  • Calypso
  • DAWN H/C 使用在测量Rg > 40 nm的温度敏感样品或聚合物时;否则使用miniDAWN
  • 用于浓度测量的Optilab

High-Concentration Protein-Protein Interactions

可能达到数百毫克/毫升蛋白质的浓度时,应采用:

  • Calypso
  • DAWN H/C 使用在测量Rg > 40 nm的温度敏感样品或聚合物时;否则使用miniDAWN
  • Optilab HC (高浓度选件),用于浓度测量
  • microCuvette 适用于浓缩,粘性溶液,无法通过 Calypso 和 MALS 的流通池时

MALS

DAWN - 最灵敏的MALS检测器。 结合18个角度的检测器来确定200 Da ~ 1 GDa的摩尔质量和10 ~ 500 nm半径的分子。

  • 制冷/加热型:-15 ~ 150 ℃

DAWN提供了处理荧光样品的特殊选项:荧光滤光片和785 nm红外激光。

miniDAWN - 灵敏度仅次于DAWN。 结合3个角度的检测器以确定摩尔质量从200 Da ~10 MDa,半径从10 ~ 50 nm的分子。 仅环境温度。


Options

WyattQELS - 集成在DAWN或miniDAWN内部的动态光散射(DLS)模块,可以在相同散射体积下同时进行DLS测量。 光纤可以取代了任何一个MALS检测角。


Accessories

Orbit - Orbit 通过以编程方式将溶剂引导至废液瓶或返回溶剂储罐,有助于节省流动相。 与Calypso结合使用时,Orbit 可以通过编程方式从两种清洗液中选择一种,以增强实验后的自动化清洗效果。

Solaris - 高效防止溶剂中细菌,真菌或藻类的生长,并保护系统免受由于污染而导致的停机。


dRI

Optilab - 独特的在线示差折光仪,可用于测量任何大分子的浓度,而与荧光发色基团无关。 高浓度的Optilab可测量高达180 mg / mL蛋白质的浓度。

CALYPSO - CG-MALS实验模拟与方法设计;Calypso流体控制与MALS/dRI数据采集;平衡离解常数Kd、绝对分子化学计量等参数测定的数据分析。

注射泵 3组由计算机控制的泵;直流伺服电动机,用于最小脉动; 每个泵具备三通分配阀,用于输入,输出和冲洗
注射泵体积 12.5 µL ~ 2.5 mL (标准配备1 mL和0.5 mL注射泵)
脱气机通道 每个泵1个,内部容积60 µL
极限压力 1 mL注射泵:200 psi
0.5 mL注射泵:400 psi
辅助输入/输出 自动进样,进样阀控制,循环阀控制,数字和模拟I / O,用于特定应用
溶剂类 水性的
湿润材料 硼硅酸盐玻璃,PEEK,PTFE,聚乙烯,氧化铝,钛,不锈钢
每次分析的典型样品量 2.5 ~ 7 mL,取决于检测器配置和分析的复杂性
测量范围

平衡解离常数,KD:100 kDa分子通常为100 pM至1 mM(实际范围随分子量和缔合化学计量而变化)

测量的可重复性

Mw: ± 5%
A2: ±50 x 100 kDa样品摩尔质量时,±0.5 x 10 -4 mol·mL
log(KD): ± 0.3

分析
   特异结合 有关更多详细信息,请参见 CALYPSO 软件
  • Self-association
  • Hetero-association
  • 多价
  • Combined self- and hetero-association
  • incompetent (inactive) fraction
  • 合作与竞争作用力
  • 与热力学非理想结合(高浓度)
  • 连接多个数据集以进行整体拟合
   非特异性相互作用
  • 自我相互作用:2nd and 3rd v维里系数
  • 异质相互作用: 具有2nd维利系数的交叉维利系数
   动力学

1st-在软件阶分析; 导出高阶动力学数据

   附加分析 dn/dc
主机要求 用于Calypso以太网连接的USB端口
用于DAWN / miniDAWN的通信
Dimensions 58 cm (长) x 37 cm (宽) x 35 cm (高)

电脑配置要求可在计算机需求中找到。

规格如有更改,恕不另行通知。

"Phenomenal service from hard working technical support staff"
"Binding studies with the Calypso are easy to set up, take only a few hours, and are easy to interpret. The technical support from Wyatt is both deeply and broadly knowledgeable. There are few places that offer the scope and quality of training Wyatt provides. I use Calypso II to measure both the stoichiometry and association constants of protein-protein interactions. Most binding methods have readouts that do not have physical meaning, such as maximum amplitude or slope of binding curve. Another major common problem is that models that describe the data contain parameters that are non-identifiable. Most experiments on the Calypso are not subject to the same issues. The determination of mass by the light scattering is not subject to the same concerns as other binding assays. 1) The mass is calculated on a calibrated instrument where all other parameters that affect light-scattering can be measured. 2) The structure that the Calypso data report has a structure that is informative on both the stoichiometry and the Kd. No more slopes or maxima! Even compared to the "Gold standard" analytical ultracentrifugation, Calypso (or composition gradient multi-angle light scattering CG-MALS) is superior. We found that non-1:1 stoichiometries of protein complexes can be very difficult to analyze with AUC data, whether using equilibrium sedimentation or velocity sedimentation. Although we get consistent results for the sedimentation rate for particles, the calculation of mass from any AUC data can run into identifiability issues. In contrast, experiments with CG-MALS can be designed to directly explore which stoichiometries can form at specific molar ratios of each particle. Furthermore, less sample and far less time is required. I strongly recommend using Wyatt instruments for particle characterization. Competitors like Malvern have not caught up and they do not provide any instrument that does anything comparable to the Calypso II. Wyatt provides unmatched service beyond the purchase of the instrument. We have used Wyatt instruments for over a decade without any drop in their excellent support." D. Brent Halling, University of Texas at Austin