Calypso

Calypso II

タンパク質-タンパク質および他の高分子と組成勾配多角度光散乱との相互作用のラベルフリー、固定化フリーの特性評価。

CG-MALS

Calypso®IIは、DAWN®またはminiDAWN®MALS検出器と組み合わせて、複雑な生体分子相互作用の結合親和性と絶対的な分子化学量論を測定します。

重量平均分子量

平衡結合定数Kdと可逆的自己およびヘテロ結合の絶対化学量論に加えて、反応または凝集速度、非特異的相互作用パラメーター（ビリアル係数）の決定、さらには重量平均分子量およびdn/dcの測定の自動化にも役立ちます。

CALYPSOソフトウェア

各Calypsoには、光散乱による溶液中の生体分子相互作用の分析に利用できる最も用途の広いソフトウェアパッケージであるCALYPSO™ソフトウェアのコピーが含まれています。

組成勾配の作成...

CG-MALSは、MALS検出器に接続されたCalypsoとオプションの濃度検出器で構成されています。 Calypsoは、サンプルの準備と送液を実行し、最大3つの異なる溶液を正確な混合比で組み合わせ、検出器に注入します。

正確な組成は、Calypsoのポンプを適切な流量比に設定することで得られます。これらはすべて、直感的なGUIを介してCALYPSOソフトウェアから制御されます。混合は、静的ミキサーを介して3つのポンプすべてから同時に溶液を分注することによって実現されます。

...MALS検出器で動作します

信頼性の高い光散乱測定を行うには、サンプルを脱気して、ろ過する必要があります。Calypsoには、PEEKチューブとフィンガータイトフィッティングを介して接続された、内蔵型少量脱気装置とフィルターハウジングが組み込まれています。フィルターハウジングもフィンガータイトで、独自の設計を採用して最大限の利便性を実現しています。

Calypsoの特徴

  • 生体適合性のある接液材料。
  • 流体経路を再編成し、必要に応じてさまざまな接液材料を利用する柔軟性。
  • 5、15、50mLのコニカルチューブを介したサンプルおよび希釈液の便利なローディング。
  • オートインジェクトアウト接点クローズ信号。CALYPSOソフトウェアでサポートされていないデータ取得および分析（DLS取得など）のために、ASTRA®またはDYNAMICS®ソフトウェアによるデータ取得をトリガーします。
  • 内蔵の洗浄ポート。実験後のクリーンアップのために、ポンプが洗浄液のリザーバーを利用できるようにします。最大2つの連続洗浄溶液の自動化。 Orbit™溶媒セレクターバルブをセットアップに追加すると、バッファー（タンパク質をクリーンアップするため）に続いて水（バッファー塩をクリーンアップするため）または洗剤に続いて水が可能になります。これらの操作は、無人操作のメソッドに追加されます。
Calypso Experimental Setup

ラベルフリー、固定化フリー

組成勾配多角度光散乱（CG-MALS）は、広範囲の高分子相互作用を特徴づけるために、異なる組成または濃度の一連の未分画サンプルを使用します。特別な変更（サンプルのタグ付けや固定化手順など）は必要ありません。サンプルにはラベルがなく、完全に溶液になっています。

様々な生体分子現象に対応します

Calypsoのハードウェアとソフトウェアでサポートされている主な分析手法は次のとおりです。

  • 動的平衡：タンパク質、オリゴヌクレオチド、その他の生体分子の特異的結合と複雑な集合体。ピコモルからミリモルまでのKD（平衡解離定数）。会合複合体の絶対分子化学量論;自己および/またはヘテロア会合
  • 非特異的高分子相互作用：自己およびクロスビリアル係数
  • ストップフローカイネティクス：凝集、解離、およびその他の時間依存反応：数秒から数時間の平衡化時間
  • Zimmプロット：溶液の平均分子量MWサイズRg、および第二ビリアル係数を決定するための濃度勾配
  • 屈折率の増分：dn/dc

Calypsoの自動化により生産性が向上し、CALYPSOソフトウェアは比類のない相互作用モデルの選択肢を提供します。表面プラズモン共鳴、沈降平衡、速度論的排除または等温滴定熱量測定、および手動CG-MALS測定など、タンパク質相互作用を特徴付ける他の手法と比較して、Calypsoは高速で正確な結果を提供します。

アプリケーション

創薬

  • 複雑な多価および多タンパク質複合体の形成を含む、酵素/阻害剤または抗体/抗原相互作用の結合親和性および化学量論を定量化する
  • タンパク質間相互作用に対する小分子の影響を研究する

プロセスの改善

  • 第二ビリアル係数を決定し、バッファーパラメータを調整して、配合の安定性と粘度を向上させます
  • 抗体精製を最適化し、製剤に対する大きな賦形剤の影響を理解するために、クロスビリアル係数を決定します

自己組織化/凝集

  • 重合またはタンパク質の会合に対する溶媒のイオン強度、pH、または添加剤の影響を定量化する
  • 分子量と回転半径の変化率、および流体力学的半径を介して自己組織化と凝集の動力学を測定します（WyattQELSモジュールまたはNanoStarおよびASTRAまたはDYNAMICSでの並列分析を使用）

バイオテクノロジーの研究開発

  • 広範囲のバッファー組成、時間、および温度スケールにわたって、高分子結合親和性および関連する複雑な化学量論を特徴付けます

一見シンプル

概念的には、Calypsoは「ただの」シリンジポンプとチューブを備えた箱ですよね？我々も-挑戦的な生体分子相互作用研究の並置と非常に敏感な光散乱装置の要求に立ち向かうまでは、そう考えていました。これらを同時に達成するためには：

  • 高精度
  • 最小限のサンプル消費
  • ペプチドからナノゲルへの高濃度モノクローナル抗体への適合性
  • pMからmMの範囲の親和性

優れた使いやすさ、正確さ、堅牢性、および装置と消耗品の合理的なコストを提供しながら、利用可能なテクノロジーの限界を拡大する必要がありました。

我々が一生懸命装置開発をしたので、あなたは苦労する必要がありません

我々は独自のシリンジポンプや圧力トランスデューサー、入手困難な30 nmのポアサイズフィルターメンブレン、少量で高効率の脱気装置など、すべての要求を満たす希少な部品を見つけるのに、私たちは何の問題もありませんでした。購入できなかったものは、一から革新・設計しました。

ユーザーは、当社独自の超低デッドボリュームのフィンガータイトフィルターハウジングに特に満足しています。これは、高親和性分析に十分な溶液清浄度を確保しながら、サンプルをほとんど保持しないようにするのに役立ちます。シリンジポンプの性能と使いやすさを最大限に高めるために、特別なバルブとシリンジがサプライヤーと共同開発されました。

CG-MALSはほとんどのユーザーにとってなじみのない領域であることを認識し、チュートリアル、アプリケーションガイド、メソッドテンプレート、および開始して順調に進むための追加のサポート資料とトレーニングも開発しました。この驚くほど強力なテクニックを最大限に活用してください。私たちはあらゆる場面でお手伝いします。

いくつかの追加のCalypso機能

レイアウトとデザインは、自動化を強化し、究極のMALS検出器であるDAWNおよびminiDAWNとの互換性を維持しながら、サンプルの使用を減らすように微調整されました。Calypsoの特別な機能は次のとおりです。

  • ほとんどのチューブは、生体適合性と少量のために0.010 "（0.25 mm）i.d. PEEKを使用しています。非水溶液の場合はPTFEまたはステンレス鋼に変更でき、粘性溶液の場合はより大きなi.d.に変更できます。
  • 特定のニーズを満たすためのさまざまなシリンジサイズ
  • サンプルとバッファーのインラインデガッシング
  • 迅速なメンテナンスのために、すべてのチューブとフィルターに簡単にアクセスできます
  • 圧力警告は、フィルター膜が飽和しているとき、またはキャピラリーチューブが詰まっているときを示します

タンパク質-リガンド結合

ほとんどのタンパク質-リガンドおよび同様の生体分子相互作用は、1 mg/mL以下で最もよく測定されます。 CG-MALS構成には、次のものが含まれている必要があります。

  • Calypso
  • 相互作用の温度調整と最高感度のためのDAWN H/C。ただし、miniDAWN（室温のみ）で十分な場合もあります。
  • サードパーティのオンラインUV/Vis検出器-推奨モデルについては、サポートにお問い合わせください

非特異的な相互作用

非特異的相互作用は通常、1〜25 mg/mLの範囲で測定されます。構成には次のものが含まれている必要があります。

  • カリプソ
  • Rg> 40nmの温度に敏感なサンプルまたは高分子を測定する場合のDAWNH/C。それ以外の場合はminiDAWN
  • 濃度測定用の Optilab®

高濃度のタンパク質間相互作用

これらの測定値は、数百mg/mLのタンパク質の濃度になる可能性があります。

  • カリプソ
  • Rg>>40nmの温度に敏感なサンプルまたはポリマー/骨材を測定する場合のDAWNH/C。それ以外の場合はminiDAWN
  • 濃度測定用のOptilabHC（高濃度オプション）
  • CalypsoおよびMALSフローセルを通過できない濃縮された粘性溶液用のmicroCuvette™

MALS

DAWN-どこでも利用できる最も感度の高いMALS検出器。 18角度に検出器を設置し、200Daから1GDaの分子量と10から500nmの半径を決定します。

  • 加熱/冷却（H / C）オプション-15°C〜 +150°C

DAWNは、蛍光フィルターまたは偏光フィルター、785nmレーザーなどの高度なオプションを提供します。

miniDAWN-感度においてDAWNに次ぐ。 3角度に検出器を設置し、200Daから20MDaまでの分子量と10から50nmまでの半径を決定します。室温のみ。


オプション

WyattQELS™-DAWNまたはminiDAWNに内蔵され、同じ散乱ボリュームで同時にDLS測定を提供する動的光散乱（DLS）モジュール。光ファイバは、任意の1つのMALS検出角度を置き換えます。


付属品

Orbit-Orbitは、プログラムで溶媒を廃液ボトルに送るか、溶媒リザーバーに戻すことで、移動相の節約に役立ちます。カリプソと組み合わせて、Orbitは、自動化された実験後のクリーンアップを強化するために、2つの洗浄溶液のいずれかをプログラムで選択するために使用されます。


dRI

Optilab-発色団に関係なく、高分子の濃度を測定するための独自のオンライン示差屈折率検出器。高濃度のOptilabは、最大180 mg/mLのタンパク質濃度に対応します。

CALYPSO-CG-MALS実験のシミュレーションとメソッド設計。流体制御およびMALS/dRIデータ取得;平衡解離定数Kd、絶対分子化学量論およびその他のパラメーターを決定するためのデータ分析。

シリンジポンプ 3つのコンピューター制御ポンプ。脈動を最小限に抑えるためのDCサーボモーター。
入力、出力、洗浄用の各ポンプの3ポート分配バルブ
シリンジボリューム 12.5 µL〜2.5 mL（1mLおよび0.5mLシリンジが標準で提供されます）
デガッサチャンネル ポンプごとに1つ、内部容量60 µL
圧力制限 1 mLシリンジ：200 psi
0.5 mLシリンジ：400 psi
補助入力/出力 自動注入、インジェクターバルブ制御、リサイクルバルブ制御、特定のアプリケーション向けのデジタルおよびアナログI / O
適応溶媒 水系
接液材料 ホウケイ酸ガラス、PEEK、PTFE、ポリエチレン、アルミナ、チタン、ステンレス鋼
分析ごとの典型的なサンプル量 検出器の構成と分析の複雑さに応じて、2.5〜7 mL
測定範囲

平衡解離定数、KD：100kDa分子に典型的な100pM〜1 mM（実際の範囲は分子量および会合化学量論によって異なります）

測定の再現性

Mw: ± 5%
A2:サンプルのモル質量が50〜100kDaの場合は±0.5x10-4mol·mL/g²
log(KD): ± 0.3

分析
   特異的結合 詳細については、CALYPSOソフトウェアを参照してください。
  • 自己会合
  • ヘテロ会合
  • 多価
  • 自己会合とヘテロ会合の組み合わせ
  • 無効な（非アクティブな）フラクション
  • 協同性と競合結合
  • 熱力学的非理想的な結合（高濃度）
  • グローバルフィットのために複数のデータセットを連結します
   非特異的な相互作用
  • 自己相互作用：第二及び第三ビリアル係数
  • ヘテロ相互作用：クロスビリアル係数と第二自己ビリアル係数
   動力学

ソフトウェアで分析された一次;高次反応速度論のデータをエクスポートする

   追加の分析 dn/dc
ホストPCの要件 Calypso用のUSBポート
DAWN/miniDAWN通信用のイーサネット接続
寸法 58 cm (L) x 37 cm (W) x 35 cm (H)

ホストPCの要件は、コンピューターの要件に記載されています。

仕様は予告なく変更される場合があります

https://www.wyatt.com/products/calypso-product-info-request.html