ultraDAWN

ultraDAWN内置NEON平台，可提供智能的用户界面，显示摩尔质量，大小和颗粒浓度的实时情况，以及系统健康状况诊断和事件历史记录。ultraDAWN具有18个光电探测器，再加上一个用于测量通过流动池传输的光的探测器，为监测多种生物物理产品关键质量属性提供了一种解决方案：

• 大分子：M_w：检测范围 10³ ~ 10⁹ g/mol ；R_g：检测范围 10 ~ 250 nm
• 纳米粒子：10 ~ 250 nm的Z平均半径和相应的颗粒浓度（浓度范围取决于颗粒尺寸）

纳米粒子：

• 半径测量范围10 ~ 250 nm
• 颗粒浓度（浓度范围取决于颗粒大小）

AAV和其他小型病毒载体：

• 实心 ：总衣壳比率Vg/Cp
• 总、实心和空衣壳滴度（AAV/mL）
• 总AAV、衣壳和基因组分子量
• 均方根半径R_g

UltraDAWN为PAT提供了多种选择，包括：

• 在线或联机配置
• 在线模式下流速最多高达150ml/min
• 流速从0.1 mL/min ~ 10 mL/min
• 通过OPC-UA与生产控制软件集成
• 与台式制备色谱和其他处理设备的模拟集成
• 通过OPC-UA与生产控制软件进行数字集成

在线RT-MALS - 适用于低于 150 mL/min的流量进行的连续过程，例如微流体药物封装或色谱纯化步骤。在线RT-MALS提供最短的反馈回路，而ultraDAWN则对整个过程进行采样。

联机RT-MALS - 适用于固定体积（例如均质器）中进行处理，或者当处理流量大于 150 mL/min时。联机RT-MALS会对溶液进行取样或从制造过程中使用流道转移到ultraDAWN，其数据几乎实时生成。

RT-MALS在生产车间

ultraDAWN和OBSERVER是简单，可靠的技术，可以在批量生产中以不同的方式使用。在初始阶段，技术人员可以目视监视摩尔质量和大小，并根据需要干预过程。随着人们对RT-MALS的功能和可靠性越来越有信心，工程师可以使用OBSERVER的可配置触发器来实现全自动过程控制。在这两种情况下，都可以在生产后检查所有数据，以确定是否遇到任何偏差。

病毒纯化

为了在离子交换色谱纯化过程中收集富含病毒的组分，RT-MALS可以监测颗粒半径R。因为颗粒半径R可以很好的区分单体病毒颗粒与较小蛋白质、DNA、病毒聚集体或细胞裂解物片段。在合适范围内，设置触发器以打开并激活收集阀，即可收集富含病毒的组分。

超滤

通过ultraDAWN测定颗粒浓度可用于浓缩病毒载体的切向流过滤步骤。ultraDAWN通过泵以在线配置连接到TFF流动路径，并连续接收样本（随后返回到TFF系统）。在OBSERVER中，当浓度高于指定终点时，触发器被编程为打开，向控制系统发出终止过程信号。

AAV capsid content and aggregation

Enrichment of full AAV vectors is often done by ion-exchange chromatography, where RT-MALS determines the full:total ratio Vg/Cp, empty and full titers and more. Increasing particle radius is useful in identifying aggregates. Here the trigger was set when Vg/Cp was between 0.4 and 1.2.

Liposome homogenization

RT-MALS monitors radius and triggers if outside the specified range, to divert out-of-spec product from contaminating the collection vessel. See AN8006: In-line monitoring of liposome size by RT-MALS.

Protein bind-and-elute purification

Protein or nucleic acid molar mass can also be monitored reliably by RT-MALS in a bind-and-elute chromatographic polishing step if the eluting concentration is below ~ 2 g/L. Here a low-molecular-weight species is seen to elute first, then monomer with increasing aggregate levels reflected in Mw.

蛋白质纯化

通过RT-MALS测定的重均分子量可用于在抛光步骤测量聚集体含量，该方法中使用到了与疏水相互作用色谱联机的ultraDAWN。在本案例中，mAb的质量为146.8 kDa ，OBSERVER的触发器范围被设置在145和152.5 kDa之间，触发器在31分钟打开，在91分钟关闭。

多糖解聚

在该过程中，当多糖达到350kDa的目标分子量时，必须终止多糖的水解。使用在线配置，从反应器中连续抽取样品，用缓冲液稀释并输送至ultraDAWN。RT-MALS监测分子量，并在MW低于指定目标分子量时停止生产过程。

OBSERVER

OBSERVER会从ultraDAWN获取实时多角度光散射数据，然后计算并报告摩尔质量、半径和粒子浓度，每分钟最多300次。当RT-MALS结果偏离规范或到达过程终点时，OBSERVER可以通过模拟电压或通过OPC-UA发送触发信号来控制过程。

通过将OBSERVER作为OPC-UA客户端的OPC-UA服务器可以满足GMP要求。

ASTRA: ultraDAWN也可通过wyatt的ASTRA®软件操作。在生产过程中收集数据并在该过程完成后进行分析，整个过程期间采样的馏分都会测量摩尔质量、尺寸或颗粒浓度用于评估质量属性。