Erweitern Sie Ihre Analysemöglichkeiten mit Triple-Detektion
Die Verwendung der Dreifach-Detektions-GPC, bestehend aus statischer Mehrwinkel-Lichtstreuung (MALS), differentielle Viskosimetrie (dVI) oder Dynamische Lichtstreuung (DLS) und differentielle Refraktometrie (dRI). Sie ermöglicht unabhängig oder in Kombination eine quantitative Analyse von:
- Mark-Houwink-Sakurada-Parameter
- Konformation (statistisch geknäult, linear gestreckt oder kugelförmig)
- Verzweigungsgrad, Verzweigungen pro Molekül in Polymeren und Dendriten
- Die Form von Proteinaggregaten oder Amyloidfibrillen
- Leere oder gefüllte Träger-Nanopartikel
DAWN®
Der empfindlichste MALS-Detektor, der auf dem Markt erhältlich ist. Beinhaltet Detektoren auf 18 Winkeln zur Bestimmung von molaren Molmassen von 200 Da bis 1 GDa und Radien von 10 bis 500 nm.
Optilab®
A Ein einzigartiges Online-Differenzialrefraktometer zur Konzentrationsmessung beliebiger Makromoleküle, unabhängig von Chromophoren. Das Hochkonzentrations-Optilab kann Proteinkonzentrationen bis zu 180 mg/mL messen.
ViscoStar®
Ein hochempfindliches Online-Differenzialviskosimeter, das in Verbindung mit SEC-MALS zur Bestimmung der Größe und Konformation aller Arten von synthetischen Polymeren und sogar Proteinen und Peptiden neben anderen Biopolymeren verwendet wird.
Der ViscoStar zeichnet sich durch die Verwendung von neuartigen Technologien aus, um die höchste Empfindlichkeit, Stabilität und Lösungsmittelkompatibilität aller verfügbaren Viskosimeter für die GPC zu bieten. Seine Benutzerfreundlichkeit und Wartungsfreundlichkeit machen es zur perfekten Ergänzung für die Lichtstreuungs- und Brechungsindexdetektoren DAWN und Optilab von Wyatt.
Nicht vermuten - Messen
Während es viele Möglichkeiten gibt, die molaren Massen oder Molekulargewichte von Makromolekülen wie Proteinen, Biopolymeren und synthetischen Polymeren zu bestimmen, gibt es nur eine, die die absoluten Molekulargewichte in Lösung schnell und effektiv ermittelt: die statische Mehrwinkel-Lichtstreuung (MALS). MALS kombiniert die präzisen Messungen der Lichtstreuungsintensität und der Konzentrationen für eine genaue Berechnung der molaren Massen in Lösung ohne Annahmen über Konformation oder Form und ohne Störungen der Probe. Alle dazu nötigen Messwerte werden direkt und absolut bestimmt. Erfahren Sie mehr über die absolute Charakterisierung und wie Sie sich auf Ihre Ergebnisse verlassen können.
Während die Säulenkalibrierung nahelegen würde, dass Hämoglobin viel kleiner als BSA ist, zeigt MALS, dass sie tatsächlich ähnliche Molmassen haben. Die Polydispersität von Hämoglobin, hier zu sehen als nachlaufende Schulter am Peak mit abnehmendem Molekulargewicht, ist auf ein dynamisches Gleichgewicht zwischen Monomeren, Dimeren und Tetrameren zurückzuführen.
Verzweigung
Das Design und die Kontrolle der Polymerverzweigung ermöglichen die Schaffung von synthetischen Materialien mit neuartigen mechanischen, thermischen und rheologischen Eigenschaften. Das zuverlässigste Mittel zur Bewertung der Verzweigung in allen Arten von Polymeren ist die Mehr-Winkel-Lichtstreuung. Sie wird von Dr. Stepan Podzimek beschrieben in 'Branching Revealed: Characterizing Molecular Structure in Synthetic and Natural Polymers by Multi-Angle Light Scattering' (Application Note und On-Demand Webinar).
Das Verzweigungsverhältnis wird durch die Beziehung zwischen molarer Masse und Größe bestimmt. Beide werden gleichzeitig und unabhängig voneinander über Mehrwinkel-Lichtstreuung gekoppelt an Größenausschlusschromatographie (SEC-MALS) oder Feldflussfraktionierung (FFF-MALS) bestimmt. Moleküle mit einem Radius von weniger als 10 nm erfordern ein ViscoStar Differenzialviskosimeter zur Größenbestimmung oder ein in den MALS-Detektor eingebettetes WyattQELS™-Modul für Dynamische Lichtstreuung zur Größenmessung.
Abb. 1. Analyse der Verzweigung durch Vergleich von Konformationsplots von linearem und verzweigtem Polystyrol.
Während SEC-MALS für eine Vielzahl von Polymeren geeignet ist, bietet FFF-MALS unter Verwendung der Eclipse™ viele Vorteile gegenüber SEC. Die FFF-basierte Trennung ist für bestimmte große, stark verzweigte Polymere, die von SEC-Säulen abnormal eluieren, zwingend erforderlich.
Abb. 2. Auftragung von RMS-Radius gegenv Elutionsvolumen von Acryl-Copolymer. Die Trennung mittels SEC-MALS zeigt abnormales Elutionsverhalten.
Abb. 3. FFF-MALS (blau gezeichnet) überwindet anormale Elutionsverläufe, die auch die Konformationsplots beeinflussen und bei bestimmten großen, stark verzweigten Polymeren in SEC-MALS (rot gezeichnet) auftreten.
Konformation
Auch wenn das Polymer nicht verzweigt ist, ist die Information über die Konformation im Verhältnis zwischen molaren Masse und Größe oder zwischen dem Verhältnis von rms-Radius Rg und Hydrodynamischem Radius Rh verfügbar.
Abb. 4. Polystyrol, PMMA, Zellulosestäbchen und Hyaluronsäure weisen unterschiedliche Steigungen auf, die verschiedenen Strukturen entsprechen.
Abb. 5. Theoretische Beziehung zwischen Masse und Radius für verschiedene Formationen.