Charakterisierung und Quantifizierung von AAV

Die AAV-Lösungen von Wyatt ermöglichen eine prozessanalytische Technologie (PAT) in Echtzeit für eine verbesserte Ausbeute, präzise Quantifizierung und die Analyse kritischer Qualitätsmerkmale (CQA) mittels dynamischer Lichtstreuung (DLS) und Mehrwinkel-Lichtstreuung (MALS), abgestimmt auf die Anforderungen von Forschung und QC.

Inhaltsverzeichnis

  1. Einführung
  2. AAV-Analysemethoden auf der Grundlage der Lichtstreuung
  3. SEC-MALS: Mehrere AAV-CQAs
  4. AAV SOP Leitfaden
  5. Implementierung & Schulung der AAV-Methode
  6. DLS: Hochdurchsatz für Formulierungs-Screening und Prozesscharakterisierung
  7. FFF-MALS: Erweiterte Charakterisierung von Aggregaten
  8. RT-MALS: Prozessanalytische Technologie (PAT) für AAVs
  9. Ressourcen
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Einführung

Adeno-assoziierte Viren (AAVs) haben sich zu einem der wichtigsten Träger für Gentherapien entwickelt. Angesichts der rasanten Entwicklung und Produktion von AAVs ist es unerlässlich, einfache und schnelle AAV-Quantifizierungsmethoden einzuführen, um die kritischen Qualitätsmerkmale (CQA) von AAV-Serotypen genau zu bestimmen und eine erweiterte Charakterisierung zu ermöglichen. Analytische Methoden, die auf der dynamischen Lichtstreuung (DLS) und der Mehrwinkel-Lichtstreuung (MALS) basieren, sind für die Quantifizierung von CQAs und anderen Merkmalen von AAV-Vektoren vorteilhaft: Sie erfordern keine speziellen Reagenzien, keine aufwändige Probenvorbereitung oder Kalibrierungskurven, sind in hohem Maße reproduzierbar und liefern Ergebnisse in nur wenigen Sekunden bis Minuten.

Klicken Sie auf die Schaltflächen, um zu erfahren, wie die Lichtstreuung zur Messung verschiedener Eigenschaften von viralen Vektoren eingesetzt wird, oder lesen Sie weiter, um mehr über die Lösungen von Wyatt für die Anforderungen der Industrie und der Behörden in Bezug auf AAVs zu erfahren.

Titer & Empty-Full Ratio

Stability & Aggregation

Purity & Extended Characterization

Process Analytics

AAV-Analysemethoden auf der Grundlage der Lichtstreuung

SEC-MALS: Mehrere AAV-CQAs

Größenausschlusschromatographie in Kombination mit Mehrwinkel-Lichtstreuung (SEC-MALS) ermöglicht eine hochpräzise AAV-Quantifizierung in einem einzigen 30-minütigen Experiment. Die folgenden AAV-Qualitätsmerkmale werden mit SEC-MALS gleichzeitig gemessen:

Mit denselben Experimenten kann eine erweiterte Charakterisierung von AAV-Vektoren vorgenommen werden:

Gerätesteuerung, Datenerfassung, Analyse und Berichterstattung werden von der ASTRA™-Software mit dem Modul Viral Vector Analysis übernommen. Wir bieten eine SEC-MALS-Methode, die speziell für die AAV-Quantifizierung entwickelt wurde und für jedes Produkt und jeden Serotyp leicht angepasst werden kann. Mit der 21 CFR Part 11-kompatiblen Option von ASTRA ist SEC-MALS für die Unterstützung von IND- oder BLA-Analysepaketen, Charge-zu-Charge-Vergleichen und Freisetzungsassays von AAV-basierten Gentherapieprodukten bestens geeignet.

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White Paper WP1615

Das WP1615: SEC-MALS for absolute biophysical characterization behandelt die SEC- MALS-Technologie für die biophysikalische Charakterisierung verschiedener Biomoleküle.

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AAV SOP Leitfaden

Dieses umfassende Dokument dient als vollständige Referenz und Wegweiser für die Anpassung, Qualifizierung und Implementierung der SEC-MALS-AAV-Methode für Ihre spezifischen Bedürfnisse.

Implementierung & Schulung der AAV-Methode

Wyatt hat ein personalisiertes AAV-Schulungsprogramm entwickelt, das eine erhebliche Zeit- und Aufwandsersparnis bei der Einarbeitung, Methodenentwicklung und Validierung ermöglicht.

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Ein komplettes SEC-MALS-System umfasst den DAWN<sup>™</sup> MALS-Detektor von Wyatt, einen Optilab<sup>™</sup> dRI-Detektor, eine AAV-Trennsäule sowie eine HPLC-Pumpe nach Industriestandard, einen Autosampler und einen UV-Detektor.

Ein komplettes SEC-MALS-System umfasst den DAWN™ MALS-Detektor von Wyatt, einen Optilab™ dRI-Detektor, eine AAV-Trennsäule sowie eine HPLC-Pumpe nach Industriestandard, einen Autosampler und einen UV-Detektor.

DLS: Hochdurchsatz für Formulierungs-Screening und Prozesscharakterisierung

DLS ermöglicht eine schnelle, zerstörungsfreie AAV-Quantifizierung mit geringem Volumen, um Größe, Größenverteilung und physikalischen Titer zu bestimmen. Die typische Experimentierzeit beträgt 30 Sekunden pro Probe.

Die AAV-Charakterisierung mittels DLS ist unerlässlich für:

Der DynaPro™ Plate Reader ist das führende Gerät für DLS mit hohem Durchsatz: Er bewertet die Produktqualität, -quantität und -stabilität für bis zu über tausend Proben gleichzeitig. Da der DynaPro Plate Reader direkt in Standard-Mikrotiterplatten misst, sind die Kosten für Verbrauchsmaterialien und Arbeitsaufwand minimal, und gängige Automatisierungswerkzeuge wie Roboterpipetten können in den Arbeitsablauf integriert werden.

DynaPro<sup>™</sup> Plate Reader<br />Automatisierte Messungen mit hohem Durchsatz.

DynaPro™ Plate Reader
Automatisierte Messungen mit hohem Durchsatz.

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White Paper WP5003

Das White Paper WP5003: Automated dynamic and static light scattering in microwell plates for fast, productive development of biologics beschreibt die Möglichkeiten des DynaPro Plate Reader für die Durchführung mehrerer Assays.

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Der DynaPro™  NanoStar™ führt dieselben Messungen in Quarzküvetten mit einem Volumen von nur 2 µL und in Einwegküvetten mit nur 4 µL durch.

Mit den Instrumentensteuerungs-, Analyse- und Visualisierungstools der DYNAMICS™ Software können Wissenschaftler problemlos mehrere Produktattribute über viele Proben hinweg bewerten, um stabile, robuste Produkte und Prozesse zu entwickeln.

FFF-MALS: Erweiterte Charakterisierung von Aggregaten

Für die Charakterisierung großer AAV-Aggregate oder anderer großer Spezies ist die Feldflussfraktionierung in Kombination mit MALS (FFF-MALS) die Methode der Wahl. Das Eclipse™ FFF-System trennt Partikel von 1 - 1000 nm in einem offenen Kanal ohne stationäre Phase und ist von unschätzbarem Wert für die Analyse von Partikeln, die für eine Trennung durch SEC zu groß sind oder durch Säulenscherung entfernt oder dissoziiert werden könnten.

Ein komplettes FFF-MALS-System umfasst den Eclipse von Wyatt, den DAWN MALS-Detektor, den Optilab dRI-Detektor, einen Trennkanal und eine HPLC-Pumpe nach Industriestandard, einen Autosampler und einen UV-Detektor.

Ein komplettes FFF-MALS-System umfasst den Eclipse von Wyatt, den DAWN MALS-Detektor, den Optilab dRI-Detektor, einen Trennkanal und eine HPLC-Pumpe nach Industriestandard, einen Autosampler und einen UV-Detektor.

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Weitere Informationen

Weitere Informationen zur Theorie und zu den Anwendungen von FFF-MALS finden Sie auf unserer FFF-MALS-Seite. Lesen Sie auch die Application Note AN2004, in der die Charakterisierung und Quantifizierung großer AAV-Aggregate mit FFF-MALS beschrieben wird.

Lesen Sie die Application Note

RT-MALS: Prozessanalytische Technologie (PAT) für AAVs

RT-MALS ist eine Echtzeittechnologie zur Bestimmung von Leer-/Voll-Verhältnis, Titer, Molmasse und Radius. Sie ist sowohl in der frühen als auch in der späten Prozessphase nützlich, um die Qualität zu überwachen, die geeignete Fraktion zu sammeln oder Abweichungen von akzeptablen AAV-Attributwerten zu erkennen. RT-MALS wird mit einem ultraDAWN™ MALS Gerät oder der OBSERVER™-Software durchgeführt.

Vorteile von RT-MALS:

  • Beschleunigung von Prozessentwicklung und Scale-up
  • Erhöhung des Ertrages, Verkürzung der Gesamtzeit bis zur Chargenfreigabe
  • Zuverlässige Aufrechterhaltung der Produktqualität

Anwendungen von RT-MALS:

  • Chromatographische Reinigung und Anreicherung von vollständigen Kapsiden
  • Konzentrierung viraler Vektoren durch Ultrafiltration
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Application Note AN8008

Erfahren Sie in unserer Application Note AN8008: Real-time monitoring and control of AAV chromatographic enrichment with RT-MALS, wie RT-MALS eingesetzt wird, um die Entwicklung eines Verfahrens zur AAV-Anreicherung durch Ionenaustauschchromatographie zu beschleunigen.

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Ressourcen