Elektrophoretische Lichtstreuung (ELS)

Als grundlegende Eigenschaften von Nanopartikeln und Emulsionen sind Ladung und Zetapotenzial für das Verständnis sowohl ihres allgemeinen Verhaltens als auch ihrer spezifischen Funktionalität von wesentlicher Bedeutung.

• Kolloidale Stabilität und Selbstorganisation: Bei herkömmlichen Kolloiden und Emulsionen wird die ELS zur Bewertung der Stabilität verwendet. Ein hoher Wert des Zetapotenzials kann auf eine stabilere Suspension hindeuten, während niedrigere Werte für die Selbstorganisation von z. B. virusähnlichen Partikeln erforderlich sind.
• Zielgerichtete Verabreichung von Medikamenten und Genen: Die Ladung und das Zetapotenzial eines Medikaments oder eines Genvektors hängen eng mit seiner Fähigkeit zusammen, in bestimmte Organe und Zellen einzudringen und seine Nutzlast effektiv und an den richtigen Ort zu bringen.

ELS im Vergleich zu anderen Technologien: Andere Methoden zur Bestimmung der elektrophoretischen Mobilität umfassen akustische Verfahren und bildgebende Verfahren wie die Mikroelektrophorese. ELS ist jedoch die bevorzugte Methode, da sie auf natürliche Weise mit anderen Lichtstreutechniken - DLS und statische Lichtstreuung (SLS) - kombiniert werden kann, um eine umfassende Charakterisierung der Größe, des Zetapotenzials und der Konzentration für Partikel in einem breiten Größenbereich von unter 1 nm bis über 1 µm zu ermöglichen.

ELS wird in großem Umfang von Wissenschaftlern und Ingenieuren in den Bereichen Nanopartikel und Materialwissenschaften eingesetzt, z. B. von

• Wissenschaftler in der Zell- und Gentherapieentwicklung, die Lipid-Nanopartikel, virale Vektoren und extrazelluläre Vesikel für eine wirksame Transduktion entwickeln und charakterisieren.
• Entwickler biopharmazeutischer Formulierungen, die an stabilen Formulierungen für eine längere Haltbarkeit arbeiten.
• Pharmazeutische Forscher, die Nano-Wirkstoffträger für die effiziente Verabreichung herkömmlicher Therapeutika untersuchen.
• Entwickler von Lebensmitteln und Getränken, die herausfinden wollen, welches Produkt das beste "Mundgefühl" hat.
• Materialchemiker, die ein Polymer mit gleichmäßiger Festigkeit und Flexibilität entwickeln oder Beschichtungen aus gleichmäßigen und stabilen Dispersionen herstellen.
• Umweltingenieure, die ihr Verständnis von Suspensionen in Lösungen für die Sanierung ausbauen.

Doppler-Analyse für die Teilchengeschwindigkeit: Die elektrophoretische Lichtstreuung macht sich den DopDpler-Effekt zunutze, um die Partikelbewegung unter einem elektrischen Feld zu messen. Der Laserstrahl wird in zwei Teile geteilt: Ein Teil (Probenstrahl) beleuchtet die Probe, wobei ein Teil des Lichts von den Partikeln in Richtung Detektor gestreut wird; der andere Teil (Referenzstrahl) wird um die Probenzelle herum, durch einen Phasenmodulator und in Richtung Detektor abgelenkt.

Die beiden Strahlen werden am Detektor rekombiniert. Die resultierenden optischen Signale werden analysiert, um die Partikelgeschwindigkeit und das Vorzeichen der Ladung zu bestimmen; diese Informationen werden mit der Größe (aus der DLS) und der Leitfähigkeit (ebenfalls vom Gerät gemessen) kombiniert, um das Zetapotenzial und die Molekülladung zu berechnen. Weitere Einzelheiten finden Sie auf der Seite ELS-Theorie.

FIDELIS - immer treu: Herkömmliche ELS-Instrumente nutzen die niederfrequente mechanische Bewegung von Spiegeln, um eine Phasenmodulation zu erzeugen, die das Verfahren der Phasenanalyse-Lichtstreuung (PALS) für die Zetapotenzialanalyse ermöglicht.

Wyatt hat dieses Paradigma mit einer neuartigen ELS-Methode durchbrochen, der faserinterferometrischen elektrophoretischen Doppler-Lichtstreuung (FIDELIS). Bei FIDELIS breiten sich die Laserstrahlen durch die optischen Fasern der Probe und der Referenz aus. Ein Paar akusto-optischer Modulatoren in der Referenzfaser moduliert die optische Phase mit hoher Geschwindigkeit.

Eine Erhöhung der Phasenmodulationsfrequenz um das 1000-fache verbessert das Signal-Rausch-Verhältnis erheblich und ermöglicht eine robuste Analyse im Frequenzbereich.

Die Messungen im ZetaStar können manuell, in einer von mehreren Zellen oder automatisch mit einem Autosampler und einer Durchflusszelle durchgeführt werden. Bei der Durchflusszelle und der Tauchzelle werden Platinelektroden verwendet, um unerwünschte elektrochemische Reaktionen zu minimieren.

Manuelle Optionen für ELS

• Quarz-Tauchzelle: Für die Messung des Zetapotenzials in der Quarz-Tauchzelle, die aus einer Quarzküvette und Tauchelektroden besteht, werden nur 65 µl Lösung benötigt.
• Einweg-Zeta-Zelle: Die Einwegzelle mit eingebauten Elektroden aus Edelstahl 316 vermeidet Verschleppungen und die Notwendigkeit, sie zwischen den Proben zu reinigen. Sie kann manuell befüllt werden und benötigt 400 µl Lösung.
• PEEK-Durchflusszelle: Die einzigartige Durchflusszelle des ZetaStar kann unter Druck gesetzt werden, um Blasenbildung in salzreichen Puffern zu vermeiden. Blasen, die sich aufgrund der Elektrolyse bilden, stören den Strom und den Laserstrahl und verhindern robuste Zetapotenzialmessungen. Das Atlas^™ Zubehör wird verwendet, um die Zelle während manueller Messungen unter Druck zu setzen. Dazu werden 500 µl Lösung benötigt (oder 350 µl ohne Atlas).

Manuelle Analysen können mit der integrierten App, DYNAMICS Touch, oder mit der PC-basierten DYNAMICS Software durchgeführt werden, was den Vergleich mehrerer Messungen ermöglicht - selbst wenn diese an verschiedenen Tagen oder mit verschiedenen Geräten durchgeführt wurden. Die DYNAMICS-Software bietet auch die Möglichkeit zur Einhaltung von 21 CFR Part 11.

Automatisierte ELS-Messungen

ELS-Messungen können mit einem Autosampler und einer Pumpe unter Kontrolle der DYNAMICS-Software automatisiert werden. Diese Module werden mit der PEEK-Durchflusszelle verbunden. Für automatisierte Messungen werden 500 µl pro Probe benötigt.

Diese Konfiguration vereinfacht die Druckbeaufschlagung - es muss lediglich ein Gegendruckregler an die Abfallleitung der Durchflusszelle angeschlossen werden.

Formulierung monoklonaler Antikörper

Formulierung monoklonaler Antikörper Das Verständnis von Protein-Protein-Wechselwirkungen ist der Schlüssel zur Verbesserung der Stabilität von therapeutischen Proteinformulierungen, und die Nettoladung stellt eine zentrale Komponente dieser Wechselwirkungen dar. Zeta-Potenzial-Messungen in Formulierungspuffern, die durch die einzigartigen ELS-Instrumente von Wyatt ermöglicht werden, helfen dabei, den Beitrag der Proteinladung zu den gesamten lang- und kurzreichweitigen Protein-Protein-Wechselwirkungen herauszufinden./p>

Erfahren Sie mehr in Roberts, D. et al., The Role of Electrostatics in Protein–Protein Interactions of a Monoclonal Antibody, Mol. Pharmaceutics 2014 und Saito, S. et al., Effects of Ionic Strength and Sugars on the Aggregation Propensity of Monoclonal Antibodies: Influence of Colloidal and Conformational Stabilities, Pharm. Res. 2013.

Stabilisierung von Eisenoxid-Nanopartikeln

Eisenoxid-Nanopartikel sind von der FDA für die systemische Anwendung zugelassen und erfreuen sich in letzter Zeit zunehmender Beliebtheit als Antigenträger für die Verabreichung von Impfstoffen. Die Verschiebung des Zetapotenzials von Eisenoxid-NP hin zu dem des dekorierenden Antigens deutet auf eine wirksame Dekoration hin.

Lesen Sie Roach et al., Comparison of Different Stabilizing Agents and Antigen Attachment Methods on Iron Oxide Nanoparticles for Vaccination, Biomed. Mat. & Devices 2023.

Polymere nicht-virale Genvektoren

Es wurde festgestellt, dass Unterschiede in der Länge von Poly(α)glutamatpolymeren, die zur Konstruktion von Polyplex-Nanoträgern für siRNA verwendet werden, deren Zetapotenzial beeinflussen, was mit der Biostabilität und physiologischen Aktivität korreliert. Lesen Sie Krivitsky, A. et al., Molecular Weight-Dependent Activity of Aminated Poly(α)glutamates as siRNA Nanocarriers, Polymers 2018.

Die Silica-Beschichtung von polymeren Nanokapseln für die mRNA-Abgabe wurde unter anderem durch eine starke Verschiebung des Zetapotenzials von positiven zu negativen Werten nachgewiesen, wie von Kamegawa, R. et al. beschrieben. Lesen Sie mehr Bioinspired Silicification of mRNA-Loaded Polyion Complexes for Macrophage-Targeted mRNA Delivery, ACS Appl. Bio. Mat. 2021.

Lipid-Nanopartikel-Gene-Vektoren

Die Beladung von LNPs mit RNA führt zu einem hohen positiven Wert des Zetapotenzials, was für Patienten nachteilig sein kann. ELS ist eine Schlüsselmethode, um sicherzustellen, dass die PEGylierung oder andere Strategien zur Verringerung der Oberflächenladung von LNPs wirksam sind. Dies wird gezeigt in Kurimoto, S. et al., PEG-OligoRNA Hybridization of mRNA for Developing Sterically Stable Lipid Nanoparticles toward In Vivo Administration, Molecules 2019.

Nanomedizinische Dekoration für spezifisches Targeting

Das Zuschneiden der Oberfläche eines Nanomedikaments auf bestimmte Zellen ist ein entscheidender Schritt bei der Herstellung von Arzneimittelträgern mit "Silberkugelcharakter". Das Zeta-Potenzial ist ein guter Indikator dafür, dass eine zielgerichtete chemische Komponente tatsächlich sicher an ein Nanopartikel gebunden ist.

Erfahren Sie, wie das ELS-Instrument von Wyatt bewies, dass die Inkubation mit einem zielgerichteten Chemokin zu gut dekorierten NPs führte: Pisani, A. et al, Chemokine-Decorated Nanoparticles Target Specific Subpopulations of Primary Blood Mononuclear Leukocytes, Nanomaterials 2022.

Wirkstoffbeladung und Biostabilität von polymeren Nanocarriern

Zusätzlich zur Bestätigung der Oberflächendekoration können Zeta-Potential-Messungen durch ELS dabei helfen, festzustellen, ob ein Medikament in das Innere einer Nanokapsel geladen wird oder an der äußeren Oberfläche haftet. Erfahren Sie mehr in Goto, A. et al., Facile Preparation of Delivery Platform of Water-Soluble Low-Molecular-Weight Drugs Based on Polyion Complex Vesicle (PICsome) Encapsulating Mesoporous Silica Nanoparticle, ACS Biomat. Sci. Eng. 2017.

Stabilität von kolloidalen Suspensionen

Das Zetapotenzial ist bekanntlich ein guter Indikator für die Stabilität von Suspensionen einfacher Kolloide wie Silbernanopartikel. Daher ist die einfache Messung des Zeta-Potenzials mit einem ZetaStar ein schneller und einfacher Weg, um präparative Methoden und Lösungsmittel zu unterscheiden. Erfahren Sie, wie in Gakiya-Teruya, M. et al., Synthesis of Highly Concentrated Suspensions of Silver Nanoparticles by Two Versions of the Chemical Reduction Method, Meth. and Prot. 2018.

Molekulare Biomarker

Extrazelluläre Vesikel entwickeln sich zu vielversprechenden Biomarkern für eine Vielzahl von Krankheiten. Während ihr molekularer Inhalt eine reichhaltige Quelle für Biomarkerdaten darstellt, hat sich gezeigt, dass das Zeta-Potenzial mit Brustkrebs und ernährungsbezogenen Unterstützungstherapien korreliert.

Um die Beziehung zwischen EV-Zetapotenzial und Brustkrebs zu erforschen, lesen Sie Mendevil-Alvarado, H. et al, Extracellular Vesicles and Their Zeta Potential as Future Markers Associated with Nutrition and Molecular Biomarkers in Breast Cancer, Mol. Sci. 2023.

Quellung und Kollaps von Hydrogelen

Hydrogel-Mikropartikel mit sehr geringer Vernetzung zeigen ein morphologisches Verhalten, das mit der Temperatur und dem pH-Wert variiert. Diese Veränderungen stehen in engem Zusammenhang mit dem Zetapotenzial der Partikel, wie in einem Webinar von Prof. Andrew Lyon und Dr. Jason Lin beschrieben.

Um das Webinar anzusehen, klicken Sie auf Investigating Hydrogel Microparticles with Light Scattering and Microscopy Tools.

Trübungsbildung in Wein

Instabile Kolloide in Wein neigen zur Bildung von Trübungen, einer unerwünschten Eigenschaft, die auf eine Hitzeeinwirkung hinweisen kann. Lebensmittelforscher untersuchten Weinkolloide mit einem Wyatt ELS/DLS-Detektor und fanden heraus, dass ein niedriger absoluter Wert des Zetapotenzials mit der Trübungsbildung korreliert und stark vom pH-Wert abhängt.

Lesen Sie über den Einsatz von ELS/DLS in der Önologie: Seidel, L. et al, Composition, ζ Potential, and Molar Mass Distribution of 20 Must and Wine Colloids from Five Different Cultivars Obtained during Four Consecutive Vintages, J. Agric. Food Chem. 2023.

Ein ELS-Experiment kann in 5 schnellen Schritten durchgeführt werden:

1. Probenvorbereitung - Filtration oder Verdünnung
2. Laden der Probe: Dispensieren in eine ZetaStar-Tauchzelle, eine Einweg-ELS-Zelle oder die PEEK-Durchflusszelle, oder Dispensieren mehrerer Proben in geeignete Autosampler-Fläschchen
3. Setzen Sie die Zelle in Ihr Gerät ein oder laden Sie die Fläschchen in das an den ZetaStar angeschlossene Autosampler-System.
4. Führen Sie die Messung durch und erfassen Sie die Daten entweder über den Touchscreen oder den angeschlossenen PC.
5. Analysieren Sie die Daten auf dem Gerät oder auf dem PC und überprüfen Sie die Datenqualitätsindikatoren, um gute Messungen zu bestätigen.

• Einwegküvetten sollten bis zur Verwendung eingewickelt bleiben, und Quarzküvetten sollten bei der Lagerung verschlossen werden.
• Puffer sollten auf 0,02 µm oder 0,1 µm filtriert werden. Die Messung reiner Puffer wird als Kontrolle empfohlen.
• Die Proben sollten zentrifugiert oder filtriert werden, wobei der zu analysierende Stoff erhalten bleiben sollte.

Die Datenerfassung ist sehr einfach: Klicken Sie auf die Schaltfläche Start, um einzelne Messungen durchzuführen, oder verwenden Sie die große Auswahl an Voreinstellungen, um verschiedene Arten von vordefinierten Experimenten einzurichten. Alternativ können Sie den Assistenten für den Experiment-Designer oder das Skript-Tool Event Scheduler verwenden, um ein Experiment von Grund auf zu erstellen und automatisch Daten zu sammeln. Alle Ergebnisse werden in Echtzeit erfasst und automatisch ausgewertet.

Zeigen Sie Ihre Ergebnisse in einer Datentabelle oder grafisch an. Alle Originaldaten sind zugänglich und können jederzeit erneut verarbeitet werden. 

DYNAMICS^™ Touch^™ ist die On-Board-Anwendung für schnelle und einfache Walk-up-Messungen des ZetaStar.

Die intuitive Touchscreen-Oberfläche führt Sie durch jeden Schritt Ihrer Messung. Zu den Schritten gehören: Auswählen, was Sie messen möchten; Eingeben von Parametern wie Küvette, Probe, Lösungsmittel und anderen Bedingungen; Klicken auf "Play", um die Messung durchzuführen; und dann Anzeigen der Ergebnisse

ZetaStar^™ kombiniert elektrophoretische, dynamische und statische Lichtstreuung für die schnelle und genaue Bestimmung mehrerer Parameter wie hydrodynamischer Radius, Polydispersität, Molekulargewicht, Partikelkonzentration, Trübung und Zetapotenzial.

Mit Aliquotvolumina von nur 2 µL und einer Temperaturregelung von -10 °C bis +120 °C holt der ZetaStar das Beste aus Ihrer wertvollen Probe heraus. Weitere Produktivität wird durch das zusätzliche Autosampler-System erreicht, das die freihändige Messung von Dutzenden von Proben unterstützt.

Die DYNAMICS^™ Touch^™  On-Board-App läuft auf dem Touchscreen des ZetaStar und ermöglicht eine intuitive, begehbare Bedienung, die selbst Gelegenheitsnutzer durch grundlegende Messungen führt. Erweiterte und umfassendere Analysen werden in DYNAMICS durchgeführt, das auf einem Standard-PC läuft.

DYNAMICS^™ - Vielseitige Software für Messungen von Größe, Größenverteilung, Partikelkonzentration, Zetapotenzial und Ladung, die Flexibilität und Intelligenz mit rigorosen Berechnungen und fortschrittlichen Analysen kombiniert. DYNAMICS bewertet automatisch jede Messung für sofortiges Feedback über die Datenqualität mit umsetzbaren Ratschlägen und ermöglicht es Ihnen, die Originaldaten für ein tiefgreifendes Verständnis zu überprüfen. DYNAMICS bietet ein optionales 21 CFR Part 11-konformes Sicherheits- und Datenbankpaket für GMP- und GLP-Labore.

Beim Kauf eines jeden Geräts bieten wir eine Vor-Ort-Installation und einen Einarbeitungsbesuch in Ihrem Labor an, um die ordnungsgemäße Einrichtung und Funktion des Geräts sicherzustellen. Außerdem bieten wir maßgeschneiderte Vor-Ort-Schulungen an, die auf Ihre speziellen Bedürfnisse zugeschnitten sind. Diese zusätzlichen Dienstleistungen sind besonders dann wünschenswert, wenn eine große Gruppe von Mitarbeitern geschult werden soll.

Für alle neuen Wyatt-Geräte erhalten Sie ein Jahr lang unbegrenzten Telefon- und E-Mail-Support sowie unsere Standardgarantie, die im ersten Jahr alle Kosten abdeckt. Unser sympathisches Team aus promovierten Wissenschaftlern und erfahrenen Technikern bietet sowohl technische als auch anwendungstechnische Unterstützung. Wir zeigen Ihnen, wie Sie Ihre Daten analysieren oder die Gerätekommunikation per Fernzugriff auf Ihren PC einrichten können.

Nach dem ersten Jahr sind jährliche Servicepläne für kontinuierlichen, unbegrenzten Telefonsupport, E-Mail-Support und Geräteservice erhältlich. Zu den Vorteilen der Servicepläne gehören jährliche vorbeugende Wartung, Vor-Ort-Kalibrierung, Requalifizierung sowie Preisnachlässe auf Ersatzteile und Arbeitsaufwand bei Reparaturen. Erfahren Sie mehr über Servicepläne.

Die Einzelheiten des Service im ersten Jahr sowie des fortlaufenden Supports können je nach Region variieren. Bitte wenden Sie sich für weitere Informationen an Ihren Wyatt-Vertreter vor Ort..

Wyatt Technology bietet ein komplettes Konformitätsprogramm einschließlich Dokumentation und Vor-Ort-Validierung für alle seine Geräte. Wir stellen die notwendigen Ressourcen und Werkzeuge zur Verfügung, um die Einhaltung der Vorschriften zu gewährleisten. Wir haben intensiv mit unseren Partnern in konformen Umgebungen zusammengearbeitet, um ein solides Paket von Dokumenten und Dienstleistungen zu erstellen. Geräte und Software von Wyatt werden in GMP-Umgebungen in der Pharma- und Biotech-Industrie sowie in anderen regulierten Branchen auf der ganzen Welt eingesetzt. Erfahren Sie mehr über unser Compliance-Programm.

Unser Flaggschiff-Schulungsprogramm Light Scattering University^® (LSU) In dem 2-, 3- oder 4-tägigen Kurs - je nachdem, welches System gekauft wird - lernen die LSU-Teilnehmer fortgeschrittene Datenverarbeitungsmethoden und alternative Analysewerkzeuge kennen, mit denen sie vielleicht noch nicht vertraut sind. Die Studenten lernen auch, wie ihre MALS- und DLS-Daten Informationen aus anderen Techniken, die sie im Labor verwenden, ergänzen. Für LSU-Absolventen werden Fortgeschrittenenkurse zu detaillierteren Techniken und Themen angeboten.

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Wir bei Wyatt wissen, dass Ausfallzeiten und Produktivitätsverluste kritisch sind. Deshalb haben wir umfassende Serviceangebote entwickelt - unsere Platin-, Gold- und Silber-Servicepläne -, die speziell darauf ausgerichtet sind, die vorbeugende Wartung und Reparatur von Geräten schnell, reibungslos und problemlos zu gestalten. Diese Pläne sind auf jährlicher Basis nach Ablauf der Gerätegarantie für das erste Jahr erhältlich und bieten zusätzlich zum Geräteservice vorrangigen Telefon- und E-Mail-Support.

Die Servicepläne Platinum und Gold bieten umfassende vorbeugende Wartung vor Ort, Reparaturdienste und Software-Updates. Ein hochqualifizierter Wyatt-Außendiensttechniker kommt in Ihre Einrichtung und führt jährliche oder halbjährliche präventive Wartungsarbeiten, Kalibrierungen und optionale Requalifizierungsprüfungen durch. Wir bieten auch Leihgeräte an, falls ein Gerät im Werk repariert werden muss. Mit unserem Silver Service Plan können Sie eine vollständige Gerätekalibrierung und Qualitätskontrollprüfung, einen vorrangigen Service mit Ersatzteilen, Arbeitsaufwand und Versand sowie denselben umfassenden technischen und Anwendungs-Support per Telefon, E-Mail und Bildschirmfreigabe wie bei den Platinum und Gold Service Plänen erwarten.

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