DYNAMICSの利点
サイズとサイズ分布–基本
平均サイズを半径、直径、または拡散係数として報告し、ピーク幅を多分散度、パーセント多分散度、または多分散度指数(PDI)として報告します。これらはすべて、DLSによって測定されます。
キュムラント法は、平均サイズと多分散度を決定します。 DYNAMICSは、ISO22412およびASTM2490-09で指定されているキュムラントアルゴリズムに従って粒子サイズを報告します。 または、高度なフィッティングのために独自のキュムラント計算を選択します。
多分散性の高いサンプルは、凝集体または複数の種の存在を示します。 非負の最小二乗(NNLS)フィッティングアルゴリズムであるレギュラリゼーションは、サイズが3〜5倍異なる母集団を解決します。 分布は、%Intensity、%Mass、または%Number分布で計算および表示できます。
広いサイズの分布の場合、平均半径だけでなく、分布全体を理解することが重要です。 DYNAMICSは、D10、D50、およびD90(分布全体のそれぞれ10%、50%、および90%未満のサンプルのサイズ)の値を使用して、累積サイズ分布(直径または半径)の計算を提供します。 (D90-D10)/D50として定義される分布の幅も計算されます。
静的光散乱による分子量
DynaPro® Plate Reader IIIまたはDynaPro® NanoStar®で、DLSと同時に、タンパク質と小さなポリマーの絶対分子量(分子量)を測定します。
同時に行われる分子量とサイズ測定の組み合わせは、分子のコンフォメーションを決定し、タンパク質のアンフォールディングと凝集によるサイズの変化を区別できます。
グラフは、タンパク質のアンフォールディングの例を示しています。 DLSで測定した半径は2nmから2.6nmに変化します。 40〜85°Cの一定の分子量と多分散度(%PD)は、加熱によるサイズの増加が、凝集ではなくアンフォールディングによるものであることを示しています。
絶対分子量分布または高分子量ポリマーの測定には、サイズ排除クロマトグラフィーであるSEC-MALSと組み合わせた多角度光散乱検出器の使用をお勧めします。
ゼータ電位と電荷
電気泳動光散乱では、DYNAMICSは何も妨げません。 最も一般的なモデル(Henry、Hückel、Smoluchowski)をサポートし、サンプルと溶液の条件に従ってゼータ電位を計算します。
DLSからのRh(同時に測定)と組み合わせて、粒子の正味電荷と実効電荷も計算されます。
さらに、DYNAMICSは、導電率、デバイ長、およびヘンリーの関数の値を報告します。
粒子濃度
1 mLあたりの粒子数は、治療、診断、およびその他の用途のナノ粒子を開発する上で重要な情報です。 DYNAMICSは、DLSとSLSを組み合わせて粒子濃度を計算します。動的光散乱は粒子サイズを決定します。粒子サイズは、材料の屈折率と総散乱強度の組み合わせで、濃度を定量化します。
例に示されているように、数マイクロリットルのサンプルと数秒の測定時間で、アデノ随伴ウイルスのモノマーと凝集体の両方の粒子サイズと濃度を決定できます。 複数の血清型をテストしたり、プロセスパラメータを評価したり、ストレージバッファの安定性を評価したりするのは簡単です。
熱安定性–メルティング、凝集、アンフォールディング
タンパク質のメルティングとアンフォールディングを監視し、臨界ミセル温度(CMT)を決定するか、熱応答性ポリマーとコロイドを調査します。 DYNAMICSは、遷移温度Tonset、Tagg、Tm、および遷移点での平均サイズを決定します。
すべての分子は異なった振る舞いをします。 そのため、DYNAMICSは、サンプルが凝集する開始転移温度、タンパク質のアンフォールディングなどのシグモイド(中点)コンフォメーション変化、およびその他の多項式分析の観点から分析を提供します。
コロイド安定性–非特異的相互作用を測定します
非特異的なタンパク質間相互作用は、IgGなどのバイオ医薬品の候補を選択し、それらの製剤を最適化するための鍵となります。
濃度系列を測定および分析することにより、A2(静的光散乱から)とkD(動的光散乱から)の両方を決定できます。
この例は、さまざまなバッファーおよび塩条件での抗体製剤のkD分析を示しています。kDの正の値は、配合の安定性を示します。
濃度分析
DYNAMICSの濃度依存性分析を使用して、臨界ミセル濃度(CMC)およびその他の濃度依存のサイズ変化を決定します。
この例は、両親媒性ポリマーの濃度依存性のサイズを示しています。 DynaProPlateReaderで各濃度を3回測定しました。 遷移の中点として定義されるCMCは、半径1.7nmで0.04mg/mLです。
あらゆるニーズに対応するパラメトリック分析
サンプルの傾向を分析する場合、制限はありません。カスタムパラメトリック分析を使用して全てのパラメータを分析できます。 半径とpH、ゼータ電位と塩濃度などのパラメータペアを選択します。 グラフに示すように、温度応答性ポリマーを分析することができます。
粘度計算
高濃度タンパク質製剤の溶液粘度は、既知のサイズのトレーサー粒子の拡散を測定することによって決定されます。 DYNAMICSでは、標準サイズの粒子(この例では250 nm)の流体力学的半径を指定し、粘度計算を「内部標準を使用」に設定するだけで、配合物の粘度が計算され、データテーブルに表示されます。
濁度または不透明度
製剤の乳白色または溶液の濁度は、濁度キャリブレーション プロットから内挿して決定できます。石英キュベットは一連の濁度標準に対して校正され、その後そのキュベットで測定した溶液の濁度が計算され、比濁単位 (NTU) でデータ テーブルに表示されます。
詳細については、濁度/不透明度のページをご覧ください。